Sadržaj
Gramova mrlja, ili jednostavno Gram, brza je i jednostavna tehnika koja ima za cilj razlikovanje bakterija prema karakteristikama njihove stanične stijenke nakon izlaganja različitim bojama i otopinama.
Dakle, pomoću bojenja po Gramu moguće je, osim oblika bakterija, provjeriti i boju koju dobivaju, a ovaj je rezultat važan za definiranje drugih strategija za identificiranje bakterijskih vrsta i za liječnika da ukaže na preventivni tretman prema mikroskopski promatrane karakteristike.
Bojenje grama obično se radi rutinski u laboratoriju i dio je pregleda za bakterioskopiju. Shvatite što je bakterioskopija i kako se to radi.
Kako se vrši mrlja po Gramu
Gramova mrlja je brza, praktična i jeftina metoda za identificiranje bakterija odgovornih za infekcije, a korisna je za liječnike da ukažu na preventivni tretman infekcije koja se može dogoditi, budući da su poznate specifične karakteristike ovih skupina bakterija,
Bojenje po Gramu vrši se u 7 glavnih koraka, no protokol se može razlikovati ovisno o laboratoriju:
- Stavite nekoliko kolonija bakterija na tobogan, dodajući kap vode kako biste olakšali homogenizaciju kolonija;
- Pustite da se malo osuši, a oštrica može brzo proći kroz plamen kako bi pogodovala sušenju, međutim važno je obratiti pažnju na temperaturu, jer ako je temperatura previsoka moguće je da dođe do promjene u strukturi bakterija, što može ometati rezultat ispit;
- Kad se dijapozitiv osuši, prekrijte bojom kristalno ljubičaste boje i pustite da djeluje oko 1 minute;
- Oprati stakalce mlazom tekuce vode i prekriti tobogan lugolom koji ima svrhu fiksiranja plave boje i pustiti da djeluje 1 minutu. Obje vrste bakterija mogu apsorbirati kompleks koji čine boja i lugol, postajući plavi;
- Zatim operite tobogan tekućom vodom i nanesite 95% -tni alkohol, ostavljajući da djeluje 30 sekundi. Alkohol je odgovoran za otapanje lipidne membrane koja stvara gram negativne bakterije i, na taj način, uklanjanje kompleksa nastalog između boje i lugola, obezbojenje tih bakterija. Međutim, u slučaju gram-pozitivnih bakterija, alkohol dehidrira staničnu stijenku gram-pozitivnih bakterija, uzrokujući sužavanje pora i čineći ih nepropusnim;
- Zatim ponovno operite u tekućoj vodi i pokrijte stakalce drugom bojom, fuksinom ili safraninom i pustite da djeluje 30 sekundi;
- Zatim operite tobogan pod tekućom vodom i ostavite da se osuši na sobnoj temperaturi.
Čim se stakalce osuši, moguće je staviti kap potopnog ulja i promatrati predmetno staklo pod mikroskopom sa objektivom od 100x, a moguće je provjeriti prisutnost ili odsutnost bakterija, kao i prisutnost kvasca i epitelnih stanica.
Čemu služi
Glavni cilj bojanja po Gramu je razlikovanje bakterija prema karakteristikama stanične stijenke i općoj morfologiji. Prema tome, prema karakteristikama opaženim pod mikroskopom, bakterije se mogu svrstati u:
- Gram-pozitivne bakterije koje se vizualiziraju plavom bojom zbog činjenice da ih alkohol ne mijenja, budući da imaju deblju staničnu stijenku i pore im se sužavaju kada su izložene lugolu;
- Gram negativne bakterije koje se vizualiziraju ružičastom / ljubičastom bojom zbog činjenice da su alkoholne boje obojene i obojene safraninom ili fuksinom.
Nakon pregledavanja bakterija pod mikroskopom, moguće je da će se u laboratoriju provesti daljnja ispitivanja kako bi se identificirale vrste bakterija. Međutim, putem Grama i povezanosti sa znakovima i simptomima koje osoba prikazuje, liječnik može ukazati na preventivni tretman dok ne postanu dostupni rezultati konkretnijih pregleda, jer je na taj način moguće smanjiti stopu replikacije bakterija i spriječiti komplikacije.